Viðhalds- og notkunaraðferð ofsíunarrörsins

Viðhalds- og notkunaraðferð ofsíunarrörsins

Virkni ofursíunarrörs:

1) Styrkur; 2) Afsöltun; 3) Skiptu um biðminni; 4) Það hefur áhrif á hreinsun að hluta.

1. Nýja ofsíunarrörið er hægt að nota beint án annarrar meðferðar;

2. Ofsíunarrörið er ekki hægt að dauðhreinsa við háan hita;

3. Meðferð á ofsíunarröri þegar skipt er um þétt prótein

Ofsíunarrörið er hægt að endurnýta. Leggið það í 0.1M NaOH í 1-2klst., þvoið það með vatni og þvoið það síðan með viðeigandi lausn (sótthreinsuðu vatni eða PBS) í skilvindunni í 3 sinnum, sem hægt er að nota til að einbeita sér nýtt prótein;

4. Meðferð á venjulega settu ofsíunarröri

Fyrir ofsíunarrörið sem oft er notað, drekkið það í 0.1M NaOH í 1-2klst., þvoið það með vatni og drekkið það í dauðhreinsuðu vatni. Vertu viss um að halda síuhimnunni blautri og koma í veg fyrir að bakteríur vaxi;

5. Meðferð á ofsíunarröri sett í langan tíma

Ef ofsíunarrörið er ekki notað í langan tíma skaltu bleyta það í 0.1M NaOH í 1-2klst., þvo það með vatni og bleyta það í 20 prósent etanóli til geymslu. Vertu viss um að halda síuhimnunni blautri og koma í veg fyrir að bakteríur vaxi;

6. Miðflóttahraði notaður fyrir ofsíunarrör

Miðflóttahraði er almennt 4000rpm (almennt er mælt með 3000g og hámarkið má ekki fara yfir 4000g). Eftir skilvindu í 5-8 mínútur er hægt að þétta 4ml sýni í minna en 1ml til tugi míkrólítra; Ef hraðinn er of mikill mun markpróteinið detta af, sem leiðir til taps á markpróteini; Lítill hraði, tímafrekt og lítil vinnuskilvirkni;

7. Varúðarráðstafanir þegar byssuhausinn nær inn í ofsíunarrörið

Þegar próteinlausn eða biðminni er bætt við ofsíunarrörið er hægt að nota bláa byssuhausinn; Hins vegar, þegar þétta markpróteinið er frásogast frá botni ofsíunarrörsins, verður að nota gula byssuhausinn; Þegar byssuhausinn er settur inn í ofsíunarrörið verður að koma í veg fyrir að það snerti síuhimnuna til að forðast að stinga síuhimnuna;

8. Dragðu úr aðsogstapi próteina í ofsíunarröri

Himna ofsíunarrörsins getur aðsogað prótein, sem mun minnka markpróteinið um það bil 30 prósent; Til að draga úr próteintapi, eftir að hafa gleypt markpróteinlausnina, hreinsaðu botn ofsíunarrörsins með próteinbuffi til að þvo megnið af próteininu sem frásogast af síuhimnunni og draga úr tapi markpróteins; Ef hreinsað prótein er þétt, gaum að því að þétta rúmmálið ætti ekki að vera of lítið; Almennt, sama hversu skilvinda er, mun um 200 µL próteinlausn haldast neðst;

9. Hvernig á að skilgreina bilun í ofsíunarröri

Við venjulega notkun, þegar síuhimnan er ekki stungin, inniheldur óblandaða próteinlausnin ekki prótein eða magnið er mjög lítið (þar á meðal markprótein), á meðan fyrsta síaða lausnin inniheldur markprótein, gefur það til kynna að síuhimnan sé ógild og þarf að skipta út fyrir nýtt ofsíunarrör.