Varúðarráðstafanir við notkun ofsíunarrörs
(1) Veldu viðeigandi útsíunarrör. Almennt ætti mólþunginn sem á að halda ekki að vera meiri en 1/3 af mólmassa markpróteins. Til dæmis, ef mólþungi markpróteins er 35kDa, er hægt að velja ofursíunarrörið með 10kDa mólmassa. Ef mólþungi markpróteinsins er um það bil 10kd, er hægt að nota ofsíunarrör með mólþyngd 3KD. Lestu vandlega notkunarhandbókina og gaum að mismunandi þolmörkum ofsíunarhimnu fyrir ýmsum efnum.
(2) Nýkeypta ofsíunin er þurr. Bættu við ofurhreinu vatni fyrir notkun og vatnið fer alveg í gegnum himnuna. Forkældu það í ísbaði eða ísskáp í nokkrar mínútur. Hellið svo vatninu út í og bætið próteinlausninni út í. Magnið sem bætt er við skal ekki fara yfir hvítu línuna efst á túpunni. Aðgerðin ætti að vera létt. Áður en próteinlausn er bætt við þarf að setja ofursíunarrörið á ís til forkælingar.
(3) Jafnvægi. Bæði massi og þyngdarpunktur ætti að vera í jafnvægi. Athugaðu að hraðinn og hröðunin ætti ekki að vera of hratt, annars skemmist ofsíunarhimnan beint. Hefja miðflótta ofsíun (skilvinda forkæling í 4 gráður). Eftir að snúningi mismunandi skilvinda er breytt í G er það öðruvísi. Stilltu hröðun skilvindunnar í lægsta gír til að minnka þrýstinginn á himnunni. Athugaðu að þú verður að bíða þar til skilvindan nær markhraða áður en þú ferð út úr skilvindunni, annars þegar vandamál er með skilvinduna geturðu ekki tekist á við það í fyrsta skipti. Stilla skal stefnu himnunnar og snúningsskaftsins í samræmi við leiðbeiningarnar (ef um er að ræða hornsnúningsskilvindu er himnan hornrétt á skaftið). Í hagnýtri notkun er hraðinn almennt lægri en í handbókinni, sem getur lengt endingartíma miðflóttapípunnar.
(4) Þegar það er þétt í 1 ml sem eftir er, taktu 50 ul stuðpúðalausn og bættu 10 ul til að flæða í gegnum til að sjá hvort það verður blátt, til að dæma hvort ofsíunarrörið leki prótein. Ef rörið lekur, hellið efra lagið og flæðið í gegnum nýja rörið og hafið ofsíun. Til að dæma nákvæmlega hvort túpan sé að leka, skilið með 5mgml BSA í 10 mín., taktu síðan flæði í gegnum, keyrðu próteinlím eða Bradford til grófmælingar, og haltu áfram að bæta við próteinlausninni sem eftir er til að einbeita sér (aðgerð á ís til að koma í veg fyrir að próteinið sé hituð) þar til öllum óblandaðri lausnunum er bætt við. Gefðu gaum að því hvort próteinútfelling eigi sér stað við skilvindu, sem leiðir til stíflu í rörum. Ef úrkoma á sér stað, ákvarða sérstaka orsök úrkomu, hvort próteinstyrkurinn sé of hár eða biðminni er óviðeigandi; Það fyrra er hægt að leysa með samtímis ofsíun með mörgum ofursíunarrörum til að draga úr styrk. Hið síðarnefnda er að skipta um mismunandi stuðpúðalausnir þar til próteinið fellur ekki út.
(5) Fyrri skrefin eru notuð til að einbeita próteini. Ef þú vilt skipta um stuðpúða, þegar heildarpróteinlausnin er þétt í um það bil 1 ml, skaltu bæta varlega við nýjum jafnalausn (ofsíun í gegnum 0.22um ofursíunarhimnu) og þétta síðan í um það bil 1 ml í þrisvar sinnum í röð. Lokarúmmál síðasta styrks fer eftir nauðsynlegum próteinstyrk, sem er yfirleitt ekki meira en 500 ul, eða það er hægt að þétta það í minna en 200 ul. Samkvæmt rúmmálsstyrknum að minnsta kosti 10 sinnum í hvert skipti getur það náð meira en 1000 sinnum þrisvar sinnum, sem getur í grundvallaratriðum náð þeim tilgangi að skipta um biðminni.
