DEAE Weak Anion Exchange Membrane Chromatography

DEAE Weak Anion Exchange Membrane Chromatography – Vörukynning

 

1. Yfirlit

DEAE veikburða anjónaskiptaskiljun er hreinsunartækni sem byggir á mismun á hleðslueiginleikum og hleðsluþéttleika ýmissa lífsameinda. Þar sem flestar lífmakrósameindir innihalda virka hópa eins og karboxýl- eða hýdroxýlhópa, er hægt að stilla hleðslueiginleika þeirra og stærð með því að breyta sýrustigi jafnalausnarinnar. Eftir að lífsameindir bindast öfugt hlaðinni anjón- eða katjónaskiptamiðli næst aðskilnaður með því að breyta jónastyrk eða pH hreyfanleikafasans. Sameindir með veikari bindisækni eru skolaðar fyrst, síðan þær sem hafa sterkari bindisækni, og ná þar með árangursríkum aðskilnaði

 

2. Kostir vöru

2.1 Mikil skilvirkni: Nær sterkri bindingu við flæðishraða sem er allt að 40 sinnum hærri en plastskiljun-undirstaða. Í samanburði við hefðbundna-beðsskiljun styttir himnuskiljun heildarferlistíma um það bil 30–40 sinnum.

2.2 Mikil bindivirkni: Himnuskiljun sýnir mikla bindingargetu og mikinn flæðihraða við lágt þrýstingsfall, sem gerir kleift að fanga hlaðnar lífsameindir í einni umferð í gegnum súluna.

2.3 Stærðanleg og sveigjanleg: Heildarröð himnaskiljunarafurða getur mætt margvíslegum hreinsunarþörfum lífmakrósameinda, sem nær yfir öll stig frá ferliþróun til stórframleiðslu-. Byggingarhönnun hylkis- styður bæði einnota-aðgerð og endurnotkun eftir hreinsun.

2.4 Bætt framleiðni: Fyrirferðarlítil hönnun lágmarkar fótspor aðstöðunnar. Með því að útrýma súlupökkun, hreinsun, hreinsunarstaðfestingu og súlugeymsluaðferðum er hægt að stjórna kerfinu beint eftir jafnajafnvægi án súlupökkunar eða geymslu. Hægt er að lækka launakostnað um allt að 50%.

 

3. Tæknilegar breytur

3.1 Byggingarefni

	rannsóknarstofu mælikvarða	lítill mælikvarði	flugmaður mælikvarða	framleiðslu mælikvarða
Rúmmál himnu	0,2ml	5ml	140ml	5L
Stuðningsuppbygging himnu	Pólýprópýlen (PP)
Himnuhúsnæði	Pólýprópýlen (PP)
Ó hringur	Kísill

3.2 Rekstrareiginleikar

	rannsóknarstofu mælikvarða	lítill mælikvarði	flugmaður mælikvarða	Framleiðslu mælikvarði
Rúmmál himnu	0,2ml	5ml	400ml	5L
Mælt er með rennsli	1-6ml/mín	25-150ml/mín	2-12L/mín	25-150L/mín
Hámarks rekstrarhiti	35 gráður
Hámarks rekstrarþrýstingur	3bar (25 gráður)
Hámarks mismunaþrýstingur	3bar (25 gráður)
Geymsluskilyrði	20% 乙醇水溶液 20% etanól vatnslausn

Mynd 1. Breytingar á hleðslugetu himnuskiljunar eftir margþætta notkun sem fylgst er með með BSA.

Að auki metum við skilvirkni hýsilfrumupróteina og kjarnsýra með því að nota DEAE himnuskiljun. Úrslitin eru eftirfarandi.

	DNA				HCP
	IgG bati	Innihald (pg/mg af IgG) með RT PCR		Fjarlægingarþáttur	Efni (ng/mg af IgG) eftir Elisa		Fjarlægingarþáttur
Hlaupa	%	Áður DEAE Membrane	Eftir DEAE Membrane	Log	Áður DEAE Membrane	Eftir DEAE Membrane	Log
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Tafla 1. Fjarlægingarhraði DNA og hýsilfrumupróteina úr CHO-tjáðu IgG með DEAE himnuskiljun.

Röð tilrauna sýndi fram á að Q himnuskiljun getur á áhrifaríkan hátt fjarlægt óhreinindi, en viðhalda háu endurheimtarhraða mark-IgG.

Að auki bárum við Gudiling himnuskiljun saman við innflutt vörumerki og hleðslugetugögnin eru sem hér segir.

Mynd 2. Hleðsluárangur mismunandi próteina á himnuskiljun okkar og samkeppnisvörum

Heildarmat sýnir að hleðslugeta okkar er sambærileg við innfluttar vörur.

Mynd 3. Frammistaða DEAE himnuskiljunareininga í kollagenpróteinprófun

Með því að nota DEAE himnuskiljunareininguna sýndu staðfestingarniðurstöður að hægt var að fanga flest markkollagenprótein og skola út með því að nota 135 mM NaCl.

Með prófun við mismunandi skolunaraðstæður komumst við að því að himnuskiljun og agarósagelskiljun sýna svipaða skolunarhegðun, þar sem próteinhreinleiki er verulega breytilegur við mismunandi saltstyrk. Í hagnýtri R&D og framleiðslu er nauðsynlegt að magnbundið ákvarða bestu jafnvægisskolunarskilyrði til að fá há-markprótein.

 

4. Klassísk umsóknarmál

Fjarlæging á DNA, veirum, hýsilfrumupróteinum og endotoxínum

Fanga plasmíð, veirur, kjarnsýrur og prótein, svo og hreinsun á fákirni

 

5. Rekstrarvinnuflæði

5.1: Undirbúningur og samsetning búnaðar

5.1.1 Himnuskiljunareiningin ætti að vera uppsett á AKTA litskiljunarkerfinu á svipaðan hátt og pakkaðar plastefnissúlur, og tryggja að flæðisstefnan sé í takt við örvarnar og inntaksstefnu. Tengdu með Luer tengi eða klemmufestingum.

5.1.2 Stilltu inntaksflæðishraðann á 5–10 MV/mín og notaðu jafnvægisjafna til að hreinsa loftið. Haltu áfram að skola þar til engar loftbólur sjást við úttakið, tengdu síðan gegndræpi úttakinu við litskiljunarkerfið

5.2:For-notkunarmeðferð

5.2.1: Stilltu inntaksflæðihraða á 5–10 MV/mín og framkvæmdu for-formeðferð með 0,5 M NaOH fyrir meira en 5 MV til að tryggja að himnan nái jafnvægi.

5.2.2: Undir sama flæðishraða skal formeðhöndla frekar með jöfnunarbuffi (1× PBS) í meira en 5 MV til að tryggja að himnan nái jafnvægi.

5.3 Litskiljunarferli

5.3.1

Stilltu inntaksflæðihraða á 5–10 MV/mín og for-meðhöndluðu með jafnvægisbuffi í meira en 5 MV þar til himnan nær jafnvægi.

5.3.2

Eftir að sýnið er forsíuað í gegnum 0,22 μm síu skaltu hlaða sýninu þar til hleðslu er lokið eða hleðslugetu litskiljunar er náð.

5.3.3

Þvoið með jafnvægisbuffi í meira en 10 MV þar til útfjólubláu gleypni minnkar niður í grunnlínu.

5.3.4

Notaðu hallaskolun eða línulega skolun í samræmi við hönnun ferlisins og safnaðu sýnum í brotum eftir þörfum.

5.4,CIP Eftir-notkunarmeðferð – CIP á himnuskiljunartæki

5.4.1

Stilltu inntaksflæðishraðann á 5–10 MV/mín og framkvæmdu hreinsunar-á-stað (CIP) meðhöndlun með 0,5 M NaOH í meira en 10 MV þar til UV-gleypni fer niður fyrir grunnlínu.

5.4.2

Eftir þvott í hringrás í 30 mínútur skaltu skipta yfir í vatnsþvott þar til pH er á milli 7–8, síðan halda áfram að þrífa með 20% etanóli þar til leiðni helst nánast stöðug.

5.5, Geymsla himnuskiljunar:

Eftir notkun og lokið CIP er hægt að fjarlægja himnueininguna og geyma hana með því að liggja í bleyti í 20% etanóli, eða geyma á netinu við stofuhita í 20% etanóllausn. Skoða skal 20% etanóllausnina og skipta um hana reglulega.

 

6.Pöntunarupplýsingar

DEAE-gerð veikburða anjónaskiptahimnuskiljunarhylkjasía

	Rannsóknarstofu-kvarða	lítill mælikvarði	Flugmaður mælikvarði	Framleiðslu mælikvarði
Vörulíkan	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Rúmmál himnu	0,2ml	5ml	400ml	5L

maq per Qat: deae veikburða anjónaskiptahimnuskiljun, Kína, birgja, framleiðendur, verksmiðja, heildsölu, magn, á lager, ókeypis sýnishorn