Himnutækni og skýring á bóluefni (Ⅱ)

Í fyrri greininni fengum við nokkra bráðabirgðakynningu á bóluefnum og bólusetningaraðferðum, og við munum halda áfram að kanna þær í restinni af þessari grein. Í framhaldi af ofangreindu munum við halda áfram að deila bóluefnisskýringum og tengdum himnuvefsumsóknum.

 

2.2.2 Áhrif eðlis- og efnafræðilegra eiginleika veira

Eftir að hafa skoðað framleiðslukerfið og aðferðir til að fjarlægja viðkomandi aðskotaefni í skýringarþrepinu, er mikilvægt að taka tillit til eiginleika veirunnar og leggja áherslu á að hámarka veiruafraksturinn.

 

2.2.2.1 Auðvelt vírus aðsog
Jákvætt hlaðin efni og síuhjálp (eins og kísilgúr) hafa verið þróuð til að bæta djúpsíunaráhrif. Þrátt fyrir að jákvæða hleðslan auki upptöku kjarnsýra og HCP, er vitað að kísilgúra bindur frumurusl og kvoða. Hins vegar geta þessi efni einnig haldið vírusnum í gegnum aðsogsbúnaðinn. Þar sem vírusinn er venjulega neikvætt hlaðinn í lausn geta rafstöðueiginleikar átt sér stað við jákvætt hlaðna síuna.
Veirur geta einnig bundist með vatnsfælnum eða ósértækum samskiptum sínum við ákveðin síuefni (eins og kísilgúr eða glertrefjar). Hjúpaðar veirur, vegna lípíðhjúps þeirra, eru næmari fyrir þessari frásog. Ef vírusinn er aðsogaður í síuna með rafstöðueiginleikum og veiruagnirnar losna við saltsamkeppni, getur það endurheimt veiruna að hluta til að skola síuna með mjög leiðandi jafnalausn. Hins vegar getur þetta einnig skolað út mengunarefni eins og HCP eða kjarnsýrur. Þess vegna er ákjósanlegt að nota annað síuefni, eins og óvirkara pólýprópýlen.
Adenovirus is easily adsorbed, but different results have been confirmed. Using positively charged diatomite and deep filters. Borosilicate glass fiber filter material is also very well recovered. On the other hand, a patent proposed by Weggeman involving clarification of 20 – 40% adenovirus losses at PER, et al. Cell cultures were prepared with similarly positively charged deep filters containing diatomite. In this case, the nominal polypropylene filter showed a very high viral recovery rate (> 90%).
Það er vel þekkt að inflúensuveirur eru viðkvæmar fyrir aðsogstapi við skýringu. Þess vegna er notkun á hleðslulausri síu, pólýprópýlen síu, hentug til að skýra inflúensusafnið. Thompson o.fl. greindu frá notkun á 1,2 μm pólýprópýlen síu með nafnverði og síðan 0.45 μm PVDF himnu til að skýra frumu-undirstaða inflúensuveiru framleidd af MDCK frumum. Alls voru gerðar níu hreinsunarprófanir á 20L kvarðanum, hleðsla 111 L / m2 fyrir 1,2 μm pólýprópýlen síu og 105 L / m2 fyrir 0,45 μm PVDF síu. Niðurstöðurnar sýndu að meirihluti hlaupandi vírusa náði sér vel (78-154%). Þeir tilkynntu einnig um allt að 58% fjarlægingu á hcDNA, en enga marktæka fjarlægingu HCP.

 

2.2.2.2 Klippa viðkvæma vírusa

Sumar vírusar (hjúpaðar eða óhuldar) sýna lágt vélrænt viðnám og geta eyðilagst við útsetningu fyrir klippingu meðan á skilvindu og himnusíun stendur. Skurkraftar sem myndast við hreinsunarskref sem fela í sér síun eða litskiljun geta valdið því að veiruhlífin falli af og hefur þannig áhrif á smitvirkni. Það fer eftir stærð, þykkt og rúmfræði hylkisins, vírushúðin getur verið brothætt eða öfugt, þola háan þrýsting. Sumar hjúpaðar veirur, eins og inflúensuveirur, eru teygjanlegar fyrir vélrænni álagi og þola mikla aflögun. Á hinn bóginn getur klippikraftur valdið því að hjúpur minna ónæmra veira, eins og afturveirra, falli af og hefur þannig áhrif á sýkingargetu veirunnar.

VLP sem mynda utanfrumu umslag eru einnig mjög viðkvæm. Hár klippihraði myndast í miðflóttaferlinu, aðallega við inntaks- og úttakshluti (hár skurðarhraði myndast við gas-vökva tengi). Þegar vírusinn var hreinsaður með hallaskilvindu veiktist flutningsgeta sumra afturveira verulega. Þegar miðflóttaaðskilnaður er hannaður verður að hafa í huga hlutfallslegan óstöðugleika veiruagna í samanburði við skurðkrafta. Miðflóttakraftur er ekki eina uppspretta klippiáfalls, mikilvægara er hönnun búnaðarins, sérstaklega við inn- og útflutning hafa einnig verulegt klippa lost. Mismunur á hönnun mismunandi voga getur leitt til mismunar á uppskeru og endurheimt vírusviðkvæmra vírusa á mismunandi mælikvarða.

Skúfnæmar vírusar ættu að vera vandlega hannaðar vegna þess að umfang klippiálagsins og tími útsetningar fyrir streitu (vegna endurrásar) getur verið hár. Fyrir vírus sem eru næmar fyrir klippi eru opin hringrásartæki (holur trefjar eða opnar plötur) ákjósanlegar til að draga úr ókyrrð og skurðkrafti í fóðurrásinni.

Val á rekstrarbreytum ætti einnig að lágmarka skemmdir á vírusagnunum: lítið þverflæði, miðlungs yfirhimnuþrýstingur (TMP) og stuttur vinnslutími.

Himnumengun við háan þrýsting leiðir til taps á veirusýkingu, hugsanlega vegna kraftanna sem klippivirkni getur virkað á veiruhjúpinn. Himnubundinn aðskilnaður byggist á stærð og uppsöfnun veiruhemla og veiruagna með miklum mólþunga getur dregið úr sýkingargetu veiruferja.

Niðurbrot vírusviðkvæmra vírusa við djúpsíun er ekki mikið skjalfest. Tap á vírusum í djúpsíun er oftast rakið til gildru, aðsogs eða tíma- og hitaháðs veiru niðurbrots vörunnar. Reyndar, jafnvel þó að vélrænt álag geti átt sér stað í NFF kerfum, er útsetningartíminn fyrir NFF vörur til að klippa mjög stuttur samanborið við aðra tækni vegna hraðrar stakrar umferðar sem upplifað er í NFF vörum.

 

2.2.2.3 Skerið í samræmi við ljósopsstærð

Hægt er að halda vírusum yfir 100 nm með því að fjarlægja mycoplasma eða dauðhreinsaðar himnur (0.22 μm og neðar). Í þessu tilviki ætti að huga sérstaklega að vali á síum. Fyrir örsíunar TFF skref eru 0.45μm eða 0.65μm himnur ákjósanlegar fyrir góðar vörurásir. Fyrir NFF fjölþrepa síun er þéttasta lagið Stærra en eða jafnt og 0,45μm. Gæta skal varúðar við val á djúpsíu, þar sem sum djúpsíutæki geta innihaldið lag af filmu, sem getur leitt til taps á afurðum vegna varðveisludrifs. Veirusamsöfnun hefur neikvæð áhrif á vírusframleiðslu og eykur varðveislu vírusa vegna vírusstærðar.

Samkvæmt einkaleyfi frá Andre og Champluvier getur einsleitun komið í veg fyrir eða takmarkað stíflu í síu með því að minnka stærð fyllingarinnar, sem gefur meiri uppskeru. Einsleitni bætti einnig síunargetu uppskerunnar, sem jókst um 2.4-3 sinnum.

Of mikil óhreinindi geta truflað endurheimt vírusa. Óhreinindi hafa tilhneigingu til að stífla síuna og stíflaðar himnuholur geta leitt til minnkaðs vírusflutningshraða. Í einkaleyfi eftir de Vocht og Veenstra er minnst á að bein skýring á háum frumuþéttleika Per. Söfnun með TFF({{0}}.65 eða 0.2 μm himnu) leiddi til endurheimtar vírusa án adenoveira. Hægt er að ná bata með því að fjarlægja DNA úr hýsilfrumu með sértækri útfellingu fyrir 0,65 μm TFF skrefið. 70% kirtilveirra.

 

 

2.3 Dæmi: Hagræðing á skýringu á veirubóluefni

Á alþjóðlegri ráðstefnu um líffræðilega ferla 2011 kynnti Sanofi Pasteur skynsamlega nálgun við skimunarsíur til að þróa nýjar skýrar raðir fyrir kandídat veirubóluefni. Rannsóknin miðar að því að vinna bug á þeim vandamálum sem blasa við við að hámarka frumu- og veiruræktunarferla. Breytingar á uppstreymisferlinu leiddu til 20% uppskerutaps og ótímabærrar síumengunar meðan á skýringarþrepinu stóð, sem leiddi til þess að engin uppbygging varð. Til þess að koma á öflugu og skalanlegu skýringarskref var þörf á algjörri endurþróun á síuröðinni, með endurheimtarhlutfall veiru sem er hærra en 85%.

Based on internal experience and scientific publications, the team selected 27 filters for an initial screening study. Small scale virus adsorption tests were performed on various filter media (polypropylene, nylon, cellulose ester, glass fiber, charged adsorption filter) and structures (pleated or deep filter). The virus yield was measured by ELISA and the clarifying efficiency of the preselected filtrate was compared by checking the reduction of turbidity. Preliminary screening studies showed that nylon and charged filters retained viral particles and virus recovery. Ten percent. The virus recovery rate of polypropylene and polyether sulfone filter was >. 80%. Endurheimtunarhlutfall sellulósaesters og glertrefja sía fer eftir mati síunnar (20% eða 90%).

Sem annað skref mat Sanofi Pasteur nokkrar samsetningar (fasa 2 eða fasa 3 raðir) af sjö síunum sem voru forvalnar í skimunarrannsókninni. Stöðugt flæðisflokkunarprófið var framkvæmt með lítilli síu. Að auki notaði þessi tilraun hærri uppskeru en í skimunarrannsókninni. Byggt á niðurstöðum um endurheimt veiru og síugetu, valdi teymið tvær bestu samsetningarnar til frekari rannsókna.

- Röð 1 (Step 2): 30 μm samanbrotin pólýprópýlen forsía að nafnvirði, fylgt eftir af samsettri sellulósaester og glertrefja fjöllaga síu (1/0,5 μm grop)

- Röð 2 (þrep 3): sama forsía (30 μm pólýprópýlen sía að nafnvirði), fylgt eftir með millilaga fjöllaga pólýprópýlen síu og að lokum ósamhverf pólýetersúlfónfilma.

 

The robustness of these two clarified sequences has been challenged by repeated constant flow sizing experiments with different harvest batches. While both potential sequences demonstrated enhanced capabilities compared to the reference sequence, only sequence 1 achieved virus recovery objectives (>85%), eins og sýnt er á mynd 1.

Mynd 1 Meðaltal vírusbata í hverju síunarþrepi. Stöðugleikarannsóknir voru metnar fyrir þrjár síunarraðir, þar af aðeins röð 1 með 30 μm nafnvirði brotnu pólýprópýleni og 1.0/0,5 μm sellulósaester og glertrefja síu náðu alþjóðlegu endurheimtarmarkmiðinu. .

Miðflótta var einnig metin sem aðal skýringarþrep, fylgt eftir með lokasíun á {{0}}.45 μm. Nokkur hraða/tímalengd pör voru prófuð. Þrátt fyrir að síunarhraði 0,45 μm hafi verið aukinn um tvisvar var lokaafraksturinn lægri en markmiðið sem var 85%. Þar af leiðandi hefur skilvinding ekki verið rannsökuð frekar.

Að lokum var árangur pólýprópýlen- og glertrefja síunarröðanna metinn á stærri skala (160 L lífreactor stærð). Síuröðin er sýnd á mynd 2.

Mynd 2 Skýrir síusamsetninguna og myndræna framsetningu á þrepaávöxtun strengsins. Lest A er hefðbundið ferli og lest B er fínstillt ferli. Bjartsýni röð B getur minnkað forsíunarsvæðið um 3 sinnum, hætt við millisíunarþrepið og minnkað lokasíunarsvæðið um 10 sinnum og þannig aukið endurheimt vírusa um 3%.

Nokkrar lotur voru hreinsaðar með góðum árangri án merki um stíflun á síu, vinnslutíma í samræmi við framleiðslumörk og veiruafrakstur > Áttatíu og fimm prósent. Fínstilling á skýringarþrepum hafði engin áhrif á niðurstreymisþrep og lykilgæðaeiginleika bóluefnisins. Þess vegna var valin skýringarröð notuð í framleiðsluferli bóluefnisins (1000 L stærð lífhverfa) og árangurinn var staðfestur.

 

03 Skýring á bakteríubóluefnum

3.1 Hugleiðingar um skýringar á bakteríubóluefnum

Samkvæmt læknasamheitaorðabókinni (2015) er bakteríubóluefni skilgreint sem sviflausn þynntra eða drepinna baktería eða mótefnavakaafleiður þeirra sem er notað til að framkalla ónæmissvörun til að koma í veg fyrir eða meðhöndla bakteríusjúkdóma. Almennt séð er hægt að skipta bakteríubóluefnum í fjóra undirflokka eftir tegund virks mótefnavaka. Þessi umboðsmaður getur verið:

- Drepur eða veikir alla lifandi bakteríur. Einnig þekkt sem BCG bóluefnið.

- Hreinsun mótefnavaka (subunit bóluefni). Miltisbrandsbóluefni eða frumukíghóstabóluefni.

- Bakteríueiturefni (eiturefni). Barnaveiki og stífkrampa eiturefni.

- Plasmíð (pDNA).

Vegna mikillar misleitni í afurðum fjölskyldunnar, eru áskoranir í uppstreymis- og niðurstreymisferli að miklu leyti háðar því hvers konar bóluefni er framleitt. Þess vegna er hægt að hreinsa eða ekki hreinsa eftir fyrstu gerjunarþrepið, þannig að hægt sé að framkvæma skýringarþrepið.

 

3.2 Skýringaráætlun um bakteríubóluefni

3.2.1 Eiturefni

Tvö algengustu eiturefnin sem framleidd eru til notkunar í bóluefni eru barnaveiki og stífkrampi, sem eru framleidd af Corynebacterium diphtheriae og Clostridium tetani, í sömu röð. Framleiðsla beggja bóluefna er háð ströngum reglugerðarkröfum. Í tækniskýrslu WHO og viðaukum hennar eru skýrar ráðleggingar til að tryggja gæði, öryggi og virkni stífkrampa- og barnaveikibóluefna. Almennar góðir framleiðsluhættir eiga við um framleiðslu beggja bóluefnanna og starfsmenn verða að fá viðeigandi þjálfun og fá örvunarbólusetningu gegn báðum sjúkdómunum.

GMP krefst þess að sýna fram á hreinleika og gæði lokaafurðarinnar. Samkvæmt WHO og EP verður að ákvarða virkni endanlegrar stífkrampabóluefnis með samanburði in vivo eða við einhverja aðra sannaða aðferð við viðeigandi viðmiðunarefni sem er kvarðað í alþjóðlegum einingum samkvæmt alþjóðlegum staðli fyrir stífkrampaeitur. Uppfærðar kröfur um verkun voru birtar árið 2011 og geta verið mismunandi eftir matsaðferðum. Einnig þarf að sýna fram á öryggi (eiturefnalaust og endurnærandi eituráhrif) hverrar lotu bóluefnis. Að lokum þarf að taka á stöðugleika bóluefna, sérstaklega í rauntíma.

 

3.2.2 Plasmíð DNA bóluefni

Plasmíð DNA bóluefni eru notuð í dýraheilbrigðisskyni og nokkur plasmíð DNA bóluefni fyrir menn eru á ýmsum stigum þróunar og klínísks mats. Eftir E. coli gerjun er bakteríunum safnað saman og þær klofnar til að losa plasmíð DNA.

Fjarlæging á frumurusli fer venjulega fram með skilvindu eða síun. Viðfangsefnið hefur verið fjallað mikið um í nýlegum ritum. Í þessu riti, núverandi andstreymis, downstream, og mótun pDNA ferli og áskoranir.

Höfundarnir veita einnig innsýn í eyðurnar í hverju skrefi hins dæmigerða pDNA framleiðsluferlis og hugsanlegar framtíðarnýjungar og/eða núverandi tæknieyður sem gætu leitt til frekari hagræðingar á ferlinu.

Plasmíð DNA bóluefni eru útbúin í tveimur þrepum. Í fyrsta lagi eru bakteríufrumurnar fjarlægðar úr ræktunarmiðlinum og í öðru lagi frumuleifarnar eftir að frumugreiningin er fjarlægð. Það fer eftir mælikvarða, frumunum er safnað með skilvindu eða TFF örsíun. Skífuhaugaskilvindan kastast út með hléum á miklum hraða og afrakstur ofurspólaðra plasmíða er léleg vegna skurðarskemmda við losun. Ef nota þarf skilvindu er best að nota solid skál skilvindu. Opin rás, flöt TFF tæki með 0.1 eða 0.2 μm örsíunarhimnum eða holtrefjatæki geta virkað vel.

Vegna þess að holtrefjatæki hafa mikla burðargetu eru þau stundum sett í forgang. Venjulega starfa þessi ferli við 3-5 sinnum styrkinn, fylgt eftir með 3-5 rúmmáli umsíunar. Til þess að draga úr klippingu og betri stjórn á himnuskautun er mjög mælt með aðgerðum til að stjórna skarpskyggni. Þrátt fyrir að skilvindur séu hagkvæmari í stórum viðskiptarekstri, hafa smærri ferlar tilhneigingu til að nota síun vegna flytjanleika og auðveldrar notkunar.

Flokkunarefni hafa verið notuð til að auðvelda vinnslu en það getur leitt til afurðataps. Sumir mæla einnig með því að nota óvirkar kísilgúragnir, fylgt eftir með pokasíun.

Cell lysis produces viscous products, including large particles, cell fragments, soluble impurities, fine colloidal particles, and pDNA. Due to the complexity of the material, removing such fine solids is a difficult separation. Gradient density deep filter or open hole structure (>0.45m) himnusíur eru góðar til að fjarlægja frumurusl. Vegna mikillar stíflu á frumurusli er lágt flæði eða lágþrýstingssíun æskileg. Tff-undirstaða örsíur hafa verið notaðar fyrir þetta þrep og pokasíur í iðnaðar mælikvarða. Stöðug (í blöndunaríláti) og samfelld (með því að nota fastan blöndunartæki í línu) sprunga þarf mismunandi síur.

 

3.3 Tilviksrannsókn: Samanburður á virkni skilvindu, NFF og TFF aðferða til að skýra stífkrampa eiturefni

Muniandi o.fl. bornar saman þrjár mismunandi aðferðir til að skýra stífkrampa eiturefni og eiturefni úr gerjunarvökva, nefnilega skilvindu, djúpsíun (NFF) og TFF. Prófunarefnið var framleitt í 400L gerjunartæki með því að nota breyttan Miller (MMM) miðil. Í skilvindurannsókninni voru frumurnar aðskildar frá hjartanu við 4000 RPM í 6 × 1L íláti í 60 mín. Sýni af floti voru tekin til að greina endurheimt eiturefna. Djúpsíun notar 0,45μm og 0,22μm djúpar síur sem innihalda kísilgúr og sellulósa til að skýra gerjunarsoðið. Ferlið er framkvæmt við 35 gráðu hita og 12psi.

Opin flatskjá TFF eining er hitabundin við 0.22μm PVDF himnu í TFF aðferðinni. TFF-undirstaða skýringarferlið var framkvæmt með krossflæðishraða 2000 l/klst. við 23 gráður, og tærða síuvökvinn var þéttur við 1000 l/klst. þverflæðishraða við 25 gráður með hefðbundinni TFF samloku 30kD PES himnu. Hreinsaði kjötvökvinn (um 6L) er þéttur 10 sinnum í þessu ofsíunarferli. Stífkrampa eiturefnapróf voru gerðar á þéttum sýnishornum til að meta endurheimt vöru.

Djúpsíun leiddi til endurheimtarhlutfalls vöru upp á um það bil 89%, þar sem TFF einingar leiddu til endurheimtarhlutfalls vöru sem var yfir 97%. Örsíun og ofsíunarferli skila stöðugt meiri endurheimtum afurða en NFF ferlið. Þessar niðurstöður eru byggðar á flokkunarprófum (Lf).

 

04Skýring á fjölsykrubóluefnum

4.1 Athugun á skýringu á fjölsykrubóluefni

Framleiðsluferli bæði ótengdra/frjálsa fjölsykrubóluefna og samtengdra fjölsykrubóluefna hefst með ræktun hýsilbakteríanna í gerjunarkassa. Í lok gerjunar er hægt að meðhöndla bakteríur með hreinsiefnum eins og DOC(natríumdeoxýkólati), Triton®X-100 eða öðrum viðeigandi hvarfefnum til að eyða bakteríunum og stuðla að losun fjölsykra. Vegna mikillar rafhlöðugetu er söfnun beint í gegnum NFF ekki hagkvæmt þar sem afköst geta verið mjög lítil. Þess vegna er kjörið val að nota skilvindu til að aðskilja frumuklumpana. Einnig er hægt að nota TFF örsíunarsviðið. Frumulausa miðstöð/penetrant sem inniheldur fjölsykruna sem vekur áhuga er skýrt frekar með NFF djúpsíunarkerfi, fylgt eftir með lífrænni síun og síðan haldið áfram í niðurstreymismeðferð til frekari hreinsunar.

 

4.2 Stefna til að skýra fjölsykrubóluefni

4.2.1 Fyrsta skýringaraðferð

Miðflótta er ein algengasta aðferðin til að aðskilja frumur frá gerjunarvökva. Það fer eftir mælikvarða, hægt er að velja samfellda skilvindu eða lotuskilvindu. Það er mikilvægt að hafa í huga að rétt hagræðing skilvinduskilyrða og virkni þeirra er nauðsynleg fyrir árangursríka niðurstreymishreinsun. Þegar ákveðin TFF himna og svitaholastærð er valin er mikilvægt að hafa í huga mólþunga fjölsykranna, sem eru oft stórar og flóknar í byggingu, með mólmassa á bilinu um það bil 500kDa í meira en 1000kDa. Vegna stórrar opinnar svitaholastærðar getur notkun 0,22μm, 0,45μm, 0,65μm MF himna tryggt árangursríka endurheimt PS sameinda í osmósulausninni.

 

4.2.2 Önnur skýringaraðferð

Tærleiki/gruggleiki frumulausu gerjunarlausnarinnar sem nær til aukahreinsunarþrepsins fer eftir tilteknum bakteríum, klofningsgerð, einstökum sermigerðum og tækninni sem notuð er fyrir aðal skýringarþrepið. Grugg miðstöðvarinnar getur verið á bilinu 50 til 150 NTU. Hægt er að nota jákvætt hlaðna brotþéttni djúpsíu úr gegndreyptu kísilgúr með fylltum sellulósatrefjum til að skýra og minnka grugg hennar í < 5NTU.

Rúmmálsflutningur þessarar djúpu síu getur verið á bilinu 150 L/m3 til 250 L/m3. Venjulega er hreinsaða vörulausnin síuð í gegnum síðari 0,45 míkrómetra afoxunargráðu eða 0,22 μm dauðhreinsaða himnu til að fjarlægja allar frumuagnir, kvoða og hugsanlegar örverur sem eftir eru.

 

4.3 Dæmi: Skýring á miðju Streptococcus pneumoniae gerjunarsoði eftir skilvindu

Frumurnar voru aðskildar með því að bæta við {{0}}.1% (v/v) gerjunarsoði af gerð 8 Streptococcus pneumoniae (20 L) með samfelldri skilvindu. Miðja safnsins er síuð í gegnum tvær aðskildar jákvætt hlaðnar og kísilgúrdjúpsíur sem innihalda sellulósatrefjar. Einstaka djúpsíusíuvökvinn var síðan síaður í gegnum lífhlaðna afoxunargráðu PVDF 0,45μm himnu. Allar síunarprófanir voru gerðar í stöðugu flæðisham með peristaltic dælum. Síunarprófanir með hlaðinni djúpsíu og Streptococcus pneumoniae sermisgerð 8 gerjunarsoði leiddu til þess að grugginn lækkaði úr um það bil 120 NTU í 3 NTU. Prófanirnar voru gerðar með flæðihraða 140.150 l/m2/klst. og endapunktsþrýstingsmunur upp á 20-25 psi, með rúmmálsflæði um það bil 180-200 l/m2.

Svipaðar síunarprófanir voru gerðar á gerjunarsoði Streptococcus pneumoniae sermisgerð 19A. Skilvindu 19A vökvinn er tærður í gegnum hlaðna djúpsíu, sem dregur úr grugganum úr um 40 NTU í 3 NTU. Prófanirnar voru gerðar við stöðugan flæðihraða um 140-160 l/m2/klst., og rúmmálsafköst upp á 200-230L/m2 náðist við endapunktsþrýsting um 15 psi. HLPC greining á vörusýnum sem safnað var við síunarmatsprófanir sýndu ekkert marktækt afraksturstap fyrir djúpsíun eða 0,45 μm (eða 0,22 μm) himnur.

 

05 Niðurstaða

Þróun skýringarferla krefst samþættingar nokkurra einingaferla eins og skilvindu, TFF-MF, djúpsíun og smitgátarsíun. Hagræðing skýringarferlisins krefst skilnings á því hvernig mismunandi einingaraðgerðir hafa áhrif á hver annan. Áskorunin er að velja tækni og verkfæri (búnað og innréttingar) til að mæta sífellt flóknari kröfum vinnsluvökva sem framleiddur eru af skilvirkari lífreactorum nútímans. Aukningin á framleiðni uppstreymis (veirutíter, frumuþéttleiki o.s.frv.), frumurusl og frumulýsiafurðir eykur erfiðleika við skýringarferlið og ruglar vali á aðskilnaðar- og síunarbúnaði.

Hönnun búnaðar, notagildi og hreinleika ætti að hafa í huga þegar val á ferlikvarða er valið. Þetta mun tryggja skilvirka umbreytingu og öryggi rekstraraðila þegar um er að ræða fargaðar síur. Til að þróa skýringarferlið er sterk samþætting skýringarþrepanna mikilvæg til að tryggja að vinnsla uppskerunnar í andstreymi sé hagkvæm. Úrval síunareininga er aðgengilegt til að auðvelda rannsóknarstofuprófanir, tilraunaframleiðslu og vinnslu í fullri stærð. Með því að innleiða vel hannaða verkáætlun fyrir stigstærð sem metur marga skýringarvalkosti er hægt að velja og stærra skýringarsíur á öruggan hátt til að vernda niðurstreymisaðgerðir eininga en lækka rekstrarkostnað.

Skýring á bóluefni býður upp á nokkrar áskoranir. Venjulega þarf síunarferlið að vera sníða að framleiðslukerfinu, óvirkjunar- eða leysiefni og mótefnavakakynningu, ekki endilega bóluefni. Hefðbundin bóluefnisferli nota venjulega skilvindu til að skýra bóluefnið í upphafi. Nútíma bóluefni með mörgum tæknipöllum og minna vinnslumagni gera bóluefni hentugra til skýringar með himnu-tengdri tækni. Nýþróuð bóluefni sem nota nútíma frumulínur og tjáningarkerfi og með því að nota skilgreindari frumuræktunaraðstæður gera mörg bóluefnisferli sem stuðla að síun.

 

Hins vegar, misleitni í mótefnavaka þættinum eða "markmótefnavaka" bóluefnavara eykur flókið síunarskýringu. Mótefnavakar eru mismunandi að stærð, yfirborðsefnafræði og hleðslu. Þessir eiginleikar hafa áhrif á afrakstur og endurheimt mótefnavaka. Bóluefni bjóða upp á einstaka áskoranir til skýringar, aðallega vegna stærðar stórsameinda þeirra. Þetta, ásamt getuvandamálum í kringum skýringar, eykur þörfina fyrir leiðbeiningar um ferliþróunaraðferðir.

Stærð og umfang starfsemi í atvinnuskyni fyrir framleiðslu bóluefna hefur veruleg áhrif á val á skýringartækni. Með því að vera staðsett framan við ferlið er rétt skýringarhagræðing mikilvægt fyrir árangur af rekstri niðurstraums eininga, hámarka ávöxtun, endurheimt og styrkleika ferlisins. Þó að skilvindu sé enn raunhæfur tæknilegur kostur fyrir aðalhreinsun, eru opnar rásar örsíunareiningar (TFF) fyrir aðalhreinsun og fínar djúpsíur eða himnusíur fyrir aukaskýringu að fá viðurkenningu í bóluefnaiðnaðinum. Þessi breyting er knúin áfram af þörfinni fyrir hraðari vinnslu, hraðri ferliþróun, færanlegum ferlum og einnota útfærslum. NFF býður upp á hagkvæmt ferli sem hentar fyrir einnota valkosti í litlum til stórum stíl. Vegna breyttra eftirlitsþarfa stuðlar framboð á gammageislun forsmitandi tækjum eða einingum sem eru hönnuð fyrir autoclaving hraðari aðlögun NFF eða TFF byggða tækni.

Mörg klassísk bóluefnisferli fela í sér þróun á starfsemi skýringareininga, að miklu leyti vegna reglubundinna takmarkana og tilheyrandi hás kostnaðar við framlengingu og endurskil eða klínískar rannsóknir. Pallferlið sem notar síunarundirstaða skýringarkerfisins hefur verið mikið notað í nokkrum líffræðilegum efnum með miklum árangri. Dæmin og tilvikin sem lýst er í þessu skjali sýna að bóluefnisframleiðendur hafa möguleika á að ná þessu stigi stöðugleika, hagkvæmni og einnota nota með því að fylgja sniðmátsaðferðinni.

Aðrir kostir síunar umfram skilvindu eru klippuviðkvæmar vírusar eða vírusar sem hafa tilhneigingu til að safnast fyrir við loftskil. Eftir því sem framleiðendur tækja koma með nýjar vörur á markað munu bóluefnisframleiðendur halda áfram að vera betur í stakk búnir fyrir skýringarferlið.

 

Sem fyrsta fyrirtækið í staðsetningarrásinni hefur Guidling Technology safnað nægilega viðeigandi reynslu af skýringu bóluefna. Guidling Technology er þróunar- og framleiðslufyrirtæki með áherslu á líflyfja- og frumurækt, hreinsun og aðskilnað. Vörur eru mikið notaðar í líflæknisfræði, greiningu, iðnaðar vökvasíun, uppgötvun, skýringu, hreinsun og einbeitingarferli; Guidling hefur með góðum árangri þróað útsíunarskilvindurör, ofsíunar/örsíunarhimnuhylki, vírusfjarlægingarsíu, snertiflæðissíubúnað, djúpan himnustafla osfrv., sem uppfylla að fullu notkunarsviðsmyndir líflyfja og frumuræktunar.

Himnur okkar og himnusíur eru mikið notaðar við styrk, útdrátt og aðskilnað forsíunar, örsíunar, ofsíunar og nanósíunar. Fjölbreytt úrval vörulína okkar, allt frá lítilli einnota rannsóknarstofusíun til framleiðslusíunarkerfa, ófrjósemisprófunar, gerjunar, frumuræktunar og fleira, getur mætt þörfum prófunar og framleiðslu.