Rannsókn á veiruhreinsunarhæfni einstofna mótefna niðurstreymisferli

Líftæknivörur sem unnar eru úr frumulínum geta verið í hættu á vírusmengun - umfangið veltur á fjölda þátta, þar á meðal uppruna efnablöndunnar, hráefna sem notuð eru, framleiðslukerfisins, hreinsiefna og hjálparefna. Rannsókn á fjarlægingu eða óvirkjun vírusa í framleiðsluferlinu er lykilskref í því að draga úr möguleikum á iatrogenic smiti sjúkdómsvaldandi vírusa og minnka þannig áhættuna, sem er nauðsynleg fyrir öryggi vara. Áður en líffræðilegar vörur geta farið í klínískar rannsóknir og markaðssettar verður að sýna fram á að framleiðsluferlið þeirra hafi getu til að fjarlægja þekktar og væntanlegar veirur.

 

01 Öryggismat á veiru með einstofna mótefnaafurð

Rannsóknir á hæfni til að fjarlægja veirur eru venjulega með því að bæta þekktri titervísaveiru við milliafurðina á mismunandi framleiðslustigum, ákvarða síðan veirutíter afgangs í sýninu sem er meðhöndlað með sérstöku ferli og að lokum meta logafækkunargildið (LRV) af vírustíternum. Ferlisskref fyrir LRV Stærri en eða jafnt og 4log10 eru almennt talin vera árangursríkar vírushreinsunarskref. Ferlið með LRV<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.

Þegar notast er við aðferðina við hermt framleiðsluferli (minnkað ferli) er nauðsynlegt að hanna sanngjarna víruseyðingar-/óvirkjunarrannsóknir og prófunaráætlun sem tengist raunverulegu framleiðsluferlinu eins og hægt er, sérstaklega skilvirkum framleiðsluferlisþrepum. Hermaferlið ætti að vera í nákvæmlega samræmi við raunverulegt ferli hvað varðar prófunarbreytur og eftirlitsskilyrði.

 

02 Gefur venjulega til kynna vírusa og sannprófunarkerfi

Algengar vísbendingarvírusar eru sýndar í töflu 1.

Á rannsóknarstigi nýlyfjaumsóknar (IND) krefst líftæknivara rannsókna á veiruúthreinsun fyrir að minnsta kosti 2 líkan vírusa, venjulega velja eina retroveiru (X-MuLV) og eina parvóveiru (MMV). Á meðan á umsóknarferli lífefnaleyfis stendur (BLA) eru rannsóknir á veirueyðingu venjulega gerðar með því að nota 3-5 sérstakar/ósérhæfðar vírusa og 3-5 ferlisþrep eru metin til að sýna fram á að varan hafi fullnægjandi öryggisþátt frá a. vírusöryggissjónarmið. Vegna mismunandi leiðbeininga hér heima og erlendis er nokkur munur á vírushreinsunarskrefum sem notuð eru við yfirlýsingar. Algengustu sannprófunarkerfin fyrir úthreinsun vírusa í mAb framleiðsluferli eru sýnd í töflu 2.

 

03 Geta til að fjarlægja vírusa eftir ferla

3.1 Geta niðurstreymisferla til að fjarlægja mismunandi vírusa

Frá og með 2009 voru einstofna mótefnavörur sendar til FDA fyrir IND og BLA, prótein A sækniskiljun, lágt pH, anjónaskiptaskiljun AEX (flæðiskyggnistilling), katjónaskiptaskiljun CEX (binding - skolunarstilling) og staðfesting á veiruúthreinsun að undanskildum veirusíun eru algengustu vísbendingaveirurnar og meðaltal og svið úthreinsunaráhrifa þeirra eru sýnd í Mynd 1.

Fyrir afturveirur, að undanskildum CEX, sem hefur LRV um það bil 3log10 (eins og sýnt er á A-súluritinu á mynd 1), voru hin ferlarnir öflugir (LRV Stærri en eða jafnt og 4log10). Herpesveirur og afturveirur hafa svipuð úthreinsunaráhrif og LRV > 4log10 (eins og sýnt er á B-súluritinu á mynd 1). Erfiðara er að fjarlægja litlar óhjúpaðar veirur, eins og parvóveiru, á áhrifaríkan hátt, eru ónæmar fyrir efnafræðilegri meðhöndlun og eru ekki auðveldlega föst í síum (sýnt á C-súluritinu á mynd 1). Aðeins AEX og litlar veirusíur voru árangursríkar við að fjarlægja parvoviridae (meðaltal LRV > 4log10).

Ferlarnir sem sýndir eru á mynd 1 eru PróteinA, AEX(flæðiskyggnihamur), CEX(samhliða-skolunarhamur), Lágt pH óvirkjun ("ófullkomin "á móti" fullkominni "fjarlægingu) og stóru og litlu ljósopi af veiru síun.

 

3.2 Áhrifaþættir eftirferla á getu til að fjarlægja veirur

Dreifing LRV-gilda fyrir hvert ferli er sýnd á mynd 2. Rannsóknirnar með 0 ~ 21og10 voru flokkaðar sem lágan LRV hópur og þær með meira en 6log10 voru flokkaðar sem háan LRV hópur til samanburðargreiningar.

 

3.2.1 PróteinA sækniskiljun

Engin marktæk fylgni var á milli LRV gildis Próteins A ferlisins og jafnvægis/þvottajafnaðar, fylliefnis, samsetningar skolefnis og pH gildis skolunar. Samnefnari hópsins með lága LRV er að hráefnið er nokkuð flókið og það getur verið að flókið samspil hráefnis og fylliefnis hafi neikvæð áhrif á getu litskiljunarsúlunnar til að fjarlægja veirur.

 

3.2.2 AEX (Flæði Í gegnum Mode)

Strauss o.fl. sýndi að pH og leiðni AEX sýna getur haft áhrif á LRV. Hins vegar sýndu tölfræðilegar niðurstöður Miesegaes o.fl. að líkt og ProteinA, hafði LRV AEX (flæðispenetration mode) enga marktæka fylgni við mismunandi stuðpúða, fylliefni, pH og leiðni, sem gæti stafað af hagræðingu á pH og leiðni. í tilkynntum málsferlisskilyrðum.

 

3.2.3 CEX (Binding - Elution Mode)

Flutningur vírusa með CEX ferli er ekki nógu öflugur. Engin marktæk fylgni var á milli LRV í hópnum með háa LRV og biðminni, reynslustigs eða hvers kyns litskiljunarsúlueiginleika, eins og súluhæð og plastefnisgerð. Hins vegar voru jafnvægis-/hleðslu- og sýrustigsgildin sem notuð voru í rannsókninni með háa LRV bæði lægri, 5,3±0,2; Í hópnum með lága LRV var pH 6.0±0.2. Annar þáttur er að saltstyrkurinn í biðminni getur einnig valdið LRV gildismun. Stuðpúðinn sem notaður var í rannsókninni með lágt LRV var með hærri saltstyrk, með meðalstyrk 290±120 mM í hleðslu/jafnvægislausninni og 340±70 mM í skolvatninu, en styrkur NaCl í rannsókninni með háa LRV var 58 ±27 mM og 183±31 mM í sömu röð.

 

3.2.4 Lágt pH óvirkjun

Í Lágt pH ferlinu er pH lykilbreyta ferlisins og pH 3,8 er nægilegt til að óvirkja afturveiruna að stigi. Lágt LRV hópurinn var með pH 3,9 en rannsóknin með hátt LRV var með pH 3,4.

 

3.2.5 Að fjarlægja vírusíun

Fyrir síur bæði með litlum og stórum ljósopi var LRV gildi MuLV fjarlægingar hvorki meira né minna en 2log10 og aðeins 1% rannsóknanna var undir 3log10 (sýnt í h og i dálkunum á mynd 2). Heildarúthreinsun retroveira með veirusíum með stórum ljósopi var minni en með veirusíum með litlu ljósopi (eins og sýnt er á C-súluritinu á mynd 1). Aðalástæðan fyrir því að hafa áhrif á niðurstöður þess að fjarlægja parvóveiru eru mismunandi síugerðir. Almennt séð getur vírussíun fjarlægt vírusa á áreiðanlegan hátt.

Ferlarnir eru Prótein A(a), AEX-penetrunarhamur (b), CEX-binding - skolunarhamur (c), AEX-binding Ⅰ skolunarhamur (d), Low pH-óvirkjun (" ófullnægjandi "og" fullkomin "úthreinsun)(e ~ g), og stór svitaholastærð (h) og lítil svitaholastærð (i ~ j) devirus síun (þar sem, a ~ i: Retrovirus; j: Parvovirus).

 

04 Nýjungar og áskoranir í mati á vírusöryggi

Stöðug þróun og nýsköpun á sviði niðurstreymis líflyfjaferla mun óhjákvæmilega leiða til nýjunga í mati á úthreinsun vírusa. Framfarir í uppstreymisferlum og niðurstreymisferlum - svo sem samfelldum lífferlum í straumi - hafa gert það að verkum að nauðsynlegt er að meta og koma á skilvirkum og öflugum ferlum til að fjarlægja veirur. Meðan á stöðugu flæði stendur er enn gert ráð fyrir að skref eins og óvirkjun vírusa og vírusasíu séu framkvæmd í lotuham. Þrátt fyrir að geta fjarlægingar vírusa í litskiljunarferlum í samfelldu flæðisham ætti ekki að vera verulega frábrugðin því sem er í lotuvinnslu, verður hún að vera studd af gögnum.

 

05 Horfur

Frá sjónarhóli veirufræðilegs öryggis má rekja frábært öryggi líflyfjaiðnaðarins að miklu leyti til þess að iðnaðurinn fylgir ströngu fylgni við þrjár lykilaðferðir fyrir veiruöryggi: nægilega uppsprettu og prófun á efni og frumubankauppsprettum, skjalfesta mat á veiruúthreinsun (veirufullgildingarrannsóknir) og veirupróf í vinnslu. Eiginleikar líffræðilegra lyfja sem framleidd eru með nýjum frumuhvarfefnum geta breyst með mismunandi áhættu og góðar áhættustjórnunaraðferðir eru nauðsynlegar til að tryggja öryggi líffræðilegra lyfja. Guidling Technology hefur upplifað faglegt tækniteymi, sem nær yfir síunarferlið frá litlum prufa, tilraunaprófi, til framleiðslu í stórum stíl, himnu- og himnusíur okkar eru mikið notaðar í forsíun, örsíun, ofsíun, nanósíunarstyrk, útdrátt og aðskilnað; Margar vörulínur okkar, allt frá lítilli einnota rannsóknarstofusíun til framleiðslumiðaðra síunarkerfa, ófrjósemisprófanir, gerjun, frumuræktun og fleira, tryggja aukna framleiðni.

Jiuling til að tryggja gæði vöru sem fyrsta vísbending, í leit að "lækka kostnað, auka skilvirkni" á leiðinni til að kanna, hlakka til að vinna með þér í framtíðinni til að takast á við áskoranir iðnaðarins og leita að betri þróun.