Tækni Óvirkjunar Og Veira Fjarlægingar Blóðafurða
Blóðafurðir eru "plasmapróteinhlutar eða blóðfrumuhlutar, svo sem albúmín úr mönnum, immúnóglóbúlín úr mönnum, storkuþáttur (náttúrulegur eða raðbrigður) rauð blóðkornaþykkni o.s.frv., aðskilin frá heilbrigðu plasma manna eða sérstaklega ónæmisplasma manna, hreinsað eða gert með raðbrigða DNA tækni, til greiningar, meðferðar eða óvirkrar ónæmisvarna“. Blóðafurðir gegna mikilvægu hlutverki í neyðartilvikum, björgun vegna stríðsáverka og forvarnir og meðferð sumra tiltekinna sjúkdóma.
Reglugerðarbakgrunnur
Öryggistryggingarvenjur þurfa að tryggja að endanlegt lyf sé öruggt fyrir eftirlitsaðila og að lokum fyrir sjúklinga og almenning. Á tíunda áratugnum gaf alþjóðlega samhæfingarráðstefnan (ICH 1998) út „Q5A: Veiruöryggismat á líftækniafurðum úr frumulínum manna eða dýra“ (Q5A: Veiruöryggismat), þar sem komið var á alþjóðlegum staðli fyrir veiruöryggi.
ICH Q5A lýsir margþættu kerfi til að prófa og hreinsa löggildingu til að ná þessu markmiði. Prófunaráætlunin leggur áherslu á frumubanka, hráefnis- og lífreactor uppskeru, ásamt áhættugreiningu vöru. Til viðbótar við prófun, krefst ICH Q5A að afmengun niðurstreymis sé metin sem bilunaröryggisráðstöfun þegar engin mengunarefni greinast andstreymis. Úthreinsunarsannprófun tryggir að ef einhver veira kemst hjá prófunarfyrirkomulaginu er hægt að fjarlægja hann og/eða gera hann óvirkan áður en hann endar í endanlegu lyfi.
Bakgrunnur að heildar vírusöryggisáætluninni
Í nútíma líftækniframleiðslu (eða lífvinnslu) eru venjulega þrjár eða fjórar einingaraðgerðir í allri hreinsuðu röðinni, sem geta fjarlægt eða gert vírusinn óvirkan. Þetta felur í sér ákveðin litskiljunarþrep (svo sem prótein A eða anjónaskipti), ræktun á lágu pH eða hreinsiefnum og vírussíur. Ekki munu öll þessi skref í raun fjarlægja eða gera alla vírusa óvirka.
Til dæmis er ræktun með lágt pH venjulega óvirk fyrir óvirkjun vírusa sem ekki eru hjúp, en hún virkar vel fyrir óvirkjun vírusa með hjúp. Við ákveðnar rekstraraðstæður getur verið að anjónaskiptasúlan geti ekki bundið og fjarlægt hlutlausa jafnrafmagnsveirur úr vörustraumnum, en hún er áhrifarík gegn súrum vírusum.
Það er sambland af þremur til fjórum sjálfstæðum og hornréttum aðgerðum sem saman tryggja vírusöryggi líftæknivara.
Almennt er gert ráð fyrir að öflugt, skilvirkt og áreiðanlegt vinnsluþrep geti fjarlægt eða óvirkt fjölda vírusa (venjulega skilgreindir sem 4 log10 eða hærri, þar sem logafækkunargildi eða LRV er reiknað sem log10 af heildarfjölda fjölda vírusa í inntakinu deilt með heildarfjölda veira í úttakinu). Hins vegar er ekki hægt að nota LRV sem einn algeran mælikvarða á virkni skrefs. Gögnin gætu verið bráðabirgðatölur. Það er auðvelt að búa til líkön, tiltölulega ónæmt fyrir breytingum á ferliskilyrðum og áhrifaríkt gegn ýmsum veirum (WHO 2004).
Veirusíun er almennt viðurkennd sem svo öflugt og áhrifaríkt ferli skref og er lykilþáttur í heildarstefnunni til að lágmarka hættuna á utanaðkomandi og innrænum veiruagnum við framleiðslu á líftæknivörum.
Veirusíur vinna oft með sterkum, stærðartengdum varðveisluaðferðum. Byggt á þessum öfluga verkunarmáta eru veirusíur líklegri en litskiljunarskref til að veita fyrirsjáanlega veirusöfnun fyrir ýmsar veirur. Þetta er vegna þess að sían er ólíklegri til að verða fyrir áhrifum af mismunandi eðlisefnafræðilegum eiginleikum mismunandi vírusa og vírus-resínvíxlverkunum sem stjórnast af rekstrarskilyrðum. Þess vegna er veirusíunarskrefið almennt notað í vel hönnuðum raðbrigða meðferðarprótínhreinsunarferlum (EMEA 1996), sem einnig hefur verið sýnt fram á að hafa sterkan árangur í plasmavinnsluiðnaðinum.
Hins vegar eru blóðafurðir eins og tvíeggjað sverð, sem bjargar ekki aðeins þúsundum mannslífa, heldur getur það einnig dreift sjúkdómum og ógnað heilsu manna. Samkvæmt tölfræði, frá 1977 til 1984, fengu að minnsta kosti 30,000 blóðþegar í Bandaríkjunum blóð smitað af alnæmisveiru. Árið 1985 smituðust 1.200 af 3000 dreyrasjúklingum í Frakklandi af alnæmi með blóðgjöf eða blóðafurðum.
Samkvæmt Alþjóðaheilbrigðismálastofnuninni eru 5% til 10% alnæmissýkinga um allan heim af völdum blóðgjafa eða blóðafurða sem smitast af alnæmi. Fyrsta tilfellið af alnæmi í Kína var sýkt með því að nota innfluttar blóðafurðir sýktar af alnæmisveiru. Að auki hefur einnig verið greint frá smiti á lifrarbólgu B og C sjúkdómum vegna blóðgjafar og blóðafurða.
1. Helstu veirur sem berast með blóðafurðum og eiginleikar þeirra
Það eru margar tegundir veira sem berast með blóði og blóðafurðum, eins og sýnt er í töflu 1. Meðal þeirra hafa HIV, HBV og HCV haft áhyggjur af innlendum og erlendum læknahringjum vegna mikillar sýkingartíðni og alvarlegs skaða.
Vegna þess að blóð og blóðafurðir hafa möguleika á að dreifa vírusum hefur það haft alvarleg áhrif á notkun þess í forvörnum og meðferð sjúkdóma. Þess vegna, við framleiðslu á blóðafurðum, verður að bæta við vírusóvirkjunar- og fjarlægingarferlum til að tryggja öryggi blóðafurða.
2. Helstu aðferðir við óvirkjun og fjarlægingu vírusa
Til að tryggja öryggi blóðafurða, auk vals á blóðgjöfum, ónæmisaðgerða þar sem hægt er, og strangrar prófunar á innheimtu blóði og aðrar ráðstafanir, er óvirkjun og fjarlæging veirumeðferðar á blóðvörum mikilvægur hlekkur til að tryggja öryggi blóðgjafar. Nokkrar algengar og árangursríkar aðferðir til að óvirkja og fjarlægja veirur eru lýst í smáatriðum hér að neðan.
I. Aðferðir við óvirkjun vírusa
1. Pasteur aðferð
Fræðilegur grundvöllur þessarar aðferðar er að eyðingarhraði veirubyggingar er mun hærri en próteinbyggingar með vali á hitastigi og virknitíma. Næstum 50 ára niðurstöður úr klínískri notkun og nýlegar dýratilraunir hafa staðfest að albúmín í lausn eftir 60 gráður, 10 klst hitameðferð, það er Pasteur sótthreinsun, getur ekki aðeins gert HBV óvirkt, heldur einnig óvirkt HCV og HIV, sem gerir albúmín að áreiðanlegasta blóðafurð í veiruöryggi.
Nýlega hefur ferli Pasteur verið útvíkkað til framleiðslu á IVIG, FVI, FIX, fíbrínógeni og öðrum vörum. Bridonnccu o.fl. bætti þessu veiruóvirkjunarferli við lághita etanólframleiðslu IVIG ferli, það er að segja Pasteur aðferðin var innleidd við aðstæður án stöðugleika, lágs salts og sýrustigs og veirutíterinn lækkaði um 5 Log. Simmonds o.fl. prófuð blóðgjafavírus (TTV) af FVⅢ og FIX þykkni efnablöndur sem eru klínískt notaðar í Bretlandi og komst að því að TTV greiningarhlutfall vara án Pasteur veiruóvirkjunar var 50% til 75% og jákvæð greiningarhlutfall af vörum eftir Pasteur óvirkjun var 0.
TTV jákvæða hlutfallið var 27% hjá 84 dreyrasjúklingum í Bretlandi sem notuðu óvirkjaða storkuþáttavörur, á meðan aðeins 1 af 19 sjúklingum sem notuðu veiruóvirkjaðar storkuþáttavörur var jákvæður, með 5% jákvætt greiningarhlutfall. Þess vegna er vírusóvirkjunarferlið mjög árangursríkt við að bæta öryggi blóðafurða.
2. Lífræn leysir ásamt yfirborðsvirku efni (S/D aðferð)
This method was first established by Horowitz et al., a blood center in New York, the principle is that organic solvents can make lipids fall off the surface of the virus, so that the structure of the virus is destroyed and the infection activity is lost. The common S/D method uses n-butyl triphosphate (TNBP) in combination with different surfactants such as Tine80, Triton X100, and sodium cholate. The effect of S/D method on the inactivation of lipid-coated viruses in blood products has been confirmed. For example, when FI concentrated preparations were treated with 0.3%TNBP and 0.2% sodium cholate at 24℃ for 6 h, the inactivation of HBV and HCV was >4 Log,HIV >4.5 Log, and the inactivation of VSV and Sindbis viruses was >4.5 Log, and the recovery rate of FVIII was >90%. Mikill fjöldi blóðafurða óvirkjaðar með S/D aðferð hefur reynst öruggur og áreiðanlegur með langtíma klínískri notkun, svo þær eru mikið notaðar. Hins vegar hefur þessi aðferð enga óvirkjunargetu gegn parvóveiru B19, HEV og öðrum ólípóhúðuðum vírusum.
3. Þurrhita óvirkjunaraðferð
Óvirkjun á þurrum hita þýðir að frostþurrkað efnablöndun er meðhöndluð með upphitun og veiran er drepin með þurrum hita. Algengar þurrhitaaðferðir eru 60 gráður ~80 gráður, 10~72 klst. hitunaraðferðir og 80 gráður, 72 klst. Strax snemma á níunda áratugnum var gagnlegt að hita FVIII frostþurrkaðan óblandaðan efnablöndu og prótrombínkomplex við 60 gráður ~ 80 gráður í 10 ~ 72 klst. Hins vegar hefur verið sannað að þessi aðferð getur ekki algjörlega óvirkjað HBV, HCV, HIV. Þurr hitameðferð við 80 gráður og 72 klst hefur reynst árangursrík við að óvirkja HBV, HCV og HIV. Það hafa einnig verið nýlegar skýrslur um frostþurrkað efnablöndur af storkuþáttum meðhöndlaðir við 100 gráður. Xu Jinbo o.fl. meðhöndluðu IgG við 100 gráður í 30 mínútur og óvirkjaðu blöðrumunnbólguveiru 8.2 Log. Sumir munu frysta þurrkað FVIII við 68 gráður í 72 klst, í þurru ástandi og síðan hitað við 100 gráður í 0,5 ~ 1 klst. Þessi aðferð er tiltölulega hagkvæm.
4. Ljósefnafræðileg aðferð
This method was first proposed by Matthews et al. The principle is that some photosensitizers have a strong affinity for the surface of the virus and the structure of the viral nucleic acid, and are easily activated under appropriate wavelength of light, thus destroying the structure of the virus in contact with them through photochemical action. The photosensitizers that have been used include: hemacoline derivatives, psoralide derivatives, phenothiazines, phthalocyanines, and cyanine 540, etc. The main feature of this method is that it can be used to inactivate the virus of whole plasma, and the inactivation of the virus of platelet products is the current research focus. Scientists from the Department of Experimental Medicine at the University of California in the United States have screened out a new psoralen derivative S-59 among more than 100 chemical modifications of psoralen. The platelets were irradiated with 150 um S-59 combined with 3 J/cm2 UVA, which could inactivate >6.7 Log of free HIV and >6.6 Log af frumum sem eru bundnar við HIV og blóðflögurnar héldust góðar eftir 7 daga virka varðveislu in vitro, sem hefur verið samþykkt af FDA fyrir klínískar rannsóknir.
Meðal þessara aðferða eru Pasteur sótthreinsunaraðferðin og S/D aðferðin samþykkt af FDA í Bandaríkjunum og eru mikið notaðar um allan heim. Þurrhitaóvirkjunaraðferð er aðallega hentugur fyrir vírusóvirkjun frostþurrkaðra lyfja. Ljósefnafræðileg aðferð hefur mikil óvirkjunaráhrif á lípíðhúðaðar vírusa og hefur verið notuð við óvirkjun á heilum plasmaveirum í Evrópu og hefur miklar horfur á óvirkjun vírusa í blóðkornahlutum. Hins vegar hafa allar þessar aðferðir sína eigin annmarka, eins og Pasteur dauðhreinsun er ekki tilvalin til að óvirkja sumar hitaþolnar veirur; S/D aðferðin gat ekki í raun óvirkjað vírusinn sem ekki er fituhúðuð. Ljósefnafræðilega aðferðin skemmdi verulega virkni sumra plasmapróteina. Núverandi klínísk notkun á eftirfylgnirannsóknum sýnir að engin veiruóvirkjunaraðferð getur tryggt að blóðafurðir séu algerlega lausar við hættu á smiti vírusa.
I. Ferlið til að fjarlægja veirur
Við framleiðslu blóðafurða getur eitt óvirkjunarferli ekki gert allar vírusar óvirkar; Að auki er vírusinn sjálfur misleitt prótein, svo sem inntak með vörunni mun valda aukaverkunum; Á sama tíma, vegna takmörkunar á tæknistigi, eru enn vírusar sem ekki finnast eða skilja eiginleika þeirra, þannig að núverandi vírusóvirkjunaraðferðir geta ekki tryggt óvirkjunaráhrif þessara vírusa. Því getur óvirkjun ein og sér ekki tryggt öryggi vörunnar og verður að fjarlægja hana úr vörunni. Þannig að tækni til að fjarlægja veirur fær sífellt meiri athygli. Tveimur algengum og árangursríkum aðferðum til að fjarlægja veirur er stuttlega lýst hér að neðan.
1. Litskiljunartækni
Litskiljunartækni vísar til notkunar ýmissa íhluta og kyrrstæðra fasasækni eða milliverkunarmuna, til að ná aðskilnaði ýmissa íhluta. Sem háþróuð tækni til framleiðslu á blóðafurðum hefur litskiljun sjálf þau áhrif að fjarlægja veirur, sérstaklega sækniskiljun og jónaskiptaskiljun. Fyrir jónaskiptaskiljun hefur skolun kosti fram yfir skarpskyggni við að fjarlægja veirur. Tafla 2 sýnir gagnatölfræði um hraða fjarlægingar HAV með litskiljunartækni í ferli albúmínframleiðslu hjá CSL Company í Ástralíu. Eins og sjá má af töflu 2 eru jónaskiptaskiljun og hlaupsíun áhrifaríkari við að fjarlægja HAV, með heildarfjarlægingarhraða upp á 10,9 Log.
Við framleiðslu á FVIII framkvæmir Baxter Healtheare ónæmissækniskiljun með því að nota and-FVIII mótefnameðhöndluð hlaup, sem geta fjarlægt (4,2±0.1)Log og (5.3±0}.9)Log frá ekki -lípíðhúðaðar veirur eins og PPV og HAV, í sömu röð.
2. Nanófilmu síun
Fyrir suma vírusa með lítið yfirborðsþvermál, eins og HAV og parvóveiru B19, er nanóhimnusíun áhrifaríkasta aðferðin til að fjarlægja. Það nýtir sér stærðarmuninn á próteinum og vírusum og aðsog vírusa af síuhimnunni til að einangra vírusa. Rannsóknarstofurannsókn var gerð á Sanquin Blood Supply Site í Hollandi á því að fjarlægja veirur með því að bæta eins þrepa, tveggja þrepa Planova 15N nanóhimnusíun við framleiðsluferlið prótrombínsfléttu. Í ljós kom að brottnám HIV, HAV og annarra veira jókst í mismiklum mæli eftir nanóhimnusíun (sjá töflu 3).
Hins vegar geta eftirfarandi vandamál komið upp þegar þessari aðferð er beitt við iðnaðarframleiðslu: Í fyrsta lagi, vegna mikillar seigju vörunnar og nærveru próteina með stórum þvermál, ætti svitaholastærð himnunnar sem sían velur ekki að vera of lítil, þannig að takmarka fjarlægingu veira með litlum þvermál eins og HCV; Í öðru lagi mun stöðugleiki svitaholastærðarstýringar himnu í síuframleiðslu hafa áhrif á fjarlægingu vírusa. Í þriðja lagi, þegar himnuop sem er minna en þvermál veiruögnarinnar er lokað, mun flæðihraði vörunnar minnka, sem hefur áhrif á afraksturinn. Því er val á himnum þar sem eiginleikar og svitaholastærð hentar þörfum unnar vöru mikilvægur þáttur í því hvort nanóhimnusíun geti fjarlægt vírusa.
3. Umræður
Undir þeirri forsendu að tryggja gæði blóðgjafa er ferlið við óvirkjun og fjarlægingu vírusa mikilvæg og nauðsynleg leið til að tryggja öryggi blóðafurða. Notkun á aðeins einu óvirku vírusferli getur ekki algerlega tryggt öryggi blóðafurða. Á grundvelli vírusóvirkjunartækninnar var vírushreinsunartækninni eins og litskiljun og nanófilmusíun bætt við, vírushreinsunarhraði jókst til muna og vírusóvirkjun og flutningsáhrif voru verulega bætt. Sem stendur hefur Evrópa greinilega lagt til að í framleiðsluferli blóðafurða verði að nota að minnsta kosti eina óvirkjun og fjarlægingu veira til að tryggja öryggi blóðafurða.
Í Kína nota flestir framleiðendur blóðafurða aðeins eitt óvirkt vírusferli í framleiðsluferlinu, svo sem Pasteur sótthreinsunaraðferð, S/D aðferð osfrv., En nota ekki víruseyðingarferlið, sem hefur alvarleg áhrif á gæði blóðafurða. Með aðild Kína að WTO verður framleiðsluferlið og gæðastaðlar innlendra blóðafurða í samræmi við heiminn, annars getur það ekki ábyrgst núverandi innlenda markaðshlutdeild, en getur heldur ekki keppt við svipaðar vörur í öðrum löndum í alþjóðlegum markaði.
Þess vegna verða framleiðendur blóðafurða í Kína að bæta framleiðsluferlið, styrkja óvirkjun og fjarlægja vírusinn til að tryggja að fullu gæði og öryggi vörunnar. Þess vegna mun það vera þróunin hjá kínverskum framleiðendum blóðafurða að nota litskiljun til að hreinsa blóðafurðir og fjarlægja vírusa til að tryggja öryggi blóðafurða.
Um Guidling
Guidling Technology er innlent hátæknifyrirtæki sem leggur áherslu á líflyf, frumurækt, hreinsun og styrk líflækninga, greiningu og iðnaðarvökva. Við höfum þróað miðflótta síu tæki, ofursíun og örsíun snælda, vírus síu, TFF kerfi, dýpt síu, holur trefjar, o.fl. Sem uppfylla að fullu umsóknarsviðsmyndir líflyfja, frumuræktunar, og svo framvegis. Himnur okkar og himnusíur eru mikið notaðar við styrk, útdrátt og aðskilnað forsíunar, örsíunar, ofsíunar og nanósíunar. Margar vörulínur okkar, allt frá lítilli einnota rannsóknarstofusíun til framleiðslu síunarkerfa, ófrjósemisprófun, gerjun, frumurækt og fleira, uppfylla þarfir prófana og framleiðslu. Guidling Technology hlakkar til að vinna með þér!